Q1 BALB/c Nude, CD-1 Nude, 和NU/NU三者有什么區(qū)別？

1. 屬于三個不同的品系：

（1）BALB/c Nude來源于BALB/c小鼠基因突變；

（2）NU/NU裸鼠最初由NIH培育成功，是一個獨立的封閉群品系；

（3）CD-1 Nude，將nu基因?qū)�入CD-1小鼠獲得該品系。

2. 遺傳學控制不同：

（1）BALB/c Nude為近交系，兄妹交配方式進行繁殖，后代基因純合程度高，個體間差異小；

（2）NU/NU、CD-1 Nude為封閉群，隨機交配方式進行繁殖，后代基因純合程度低，個體間差異大。

3. 生理學性狀的相同點：

繁育方式均采用♂nu/nu×♀nu/+，后代個體均有純合體 “nu/nu”（無毛）和雜合體“nu/+”（有毛）之分，比例接近1:1 。

4. 免疫缺陷角度：三者相同

都沒有胸腺，不能產(chǎn)生T淋巴細胞；但是B淋巴細胞和NK細胞功能正常。

5. 使用角度

BALB/c Nude、NU/NU、CD-1 Nude均可用于腫瘤學研究和腫瘤移植（不排除三種裸鼠對某些特定瘤株的差異）。

Q2 我購買的裸鼠養(yǎng)了一段時間后，發(fā)現(xiàn)體表有大量皮屑，請問是什么原因？

出現(xiàn)這個現(xiàn)象一般有兩個方面的原因：

1)彌漫性皮炎：細菌、真菌感染、營養(yǎng)因素缺乏引起的皮膚角質(zhì)化現(xiàn)象。這種彌漫性皮炎癥狀一般為散發(fā)出現(xiàn)，同一個籠盒內(nèi)動物個體之間不具備傳染性。此時，牛棒狀桿菌檢測為陰性。

2)第二個原因是裸鼠感染了牛棒狀桿菌(Corynebacterium bovis)，導致皮膚“鱗屑”現(xiàn)象。此時，如果將裸鼠送檢，可以檢測到牛棒狀桿菌為陽性：

a)革蘭氏陽性桿菌

b)是一種最常見的大棒狀桿菌(Large Corynebacterium)

c)免疫功能正常的大小鼠一般不會感染

d)對無毛鼠和免疫缺陷鼠致病，一旦感染，幾乎是終身攜帶

e)組織學檢查可見彌漫性棘層肥厚

f)臨床癥狀：感染后7-10天出現(xiàn)“鱗屑”癥狀，該癥狀會在14-20天后消失

g)對動物影響：體重減輕、攝水量增加、移植物生長緩慢、對化療敏感性增加

h)去除：感染后很難消除。需要環(huán)境徹底消毒，動物重新引種或凈化

Q3 感染了棒狀桿菌的裸小鼠會傳染嗎？

會傳染。牛棒狀桿菌會存在于感染小鼠的皮屑中，可以通過空氣和接觸傳播，能夠引起同一籠和同一個房間其他個體的感染。

Q4 荷瘤裸小鼠感染了棒狀桿菌，腫瘤還能用于傳代保種嗎？

不建議繼續(xù)傳代保種。

（1）牛棒狀桿菌主要感染和作用部位為皮膚，同時從被感染動物的糞便、口咽部或被污染的環(huán)境中都可以分離到病菌。其對動物的影響主要為因皮膚損傷、厭食、瘙癢引起的脫水及體重 丟失，對免疫系統(tǒng)的影響未知。

（2）有美國專家提到過牛棒狀桿菌可能會污染腫瘤組織，并隨其傳代而感染其他動物。也許歸因于下面的原因：

a) 取材時的污染：荷瘤鼠感染了牛棒狀桿菌，一方面機體自身在較長的一段時間內(nèi)會攜帶該菌，同時由于牛棒狀桿菌存在于皮屑中，可以傳播到（或附著在）房間內(nèi)任何一個地方，籠架 具、地面、墻壁、天花板、門手，甚至操作人員的手套、用于腫瘤組織取材的工作臺、手術(shù)器械，因此取材時如果稍不注意，就會被污染，污染后的腫瘤組織自然會導致后一批被接種個體的 感染。

b) 環(huán)境對動物的污染：由于牛棒狀桿菌是一種很難、很難根除的細菌，接種了干凈腫瘤組織的小鼠如果飼養(yǎng)在沒有徹底根除牛棒狀桿菌的環(huán)境中，也會出現(xiàn)陽性感染。

Q5 對于牛棒狀桿菌感染，有哪些可行性預防措施？

(1) 硬件設(shè)施：大小鼠應飼養(yǎng)在SPF級動物設(shè)施中，具體硬件指標應符合GB 14925的要求。

(2) 儀器設(shè)備、實驗器材：籠盒、籠架等采取高溫（≥80℃）和/或高壓滅菌的方式進行消毒，不適合高壓的儀器設(shè)備、實驗器材使用含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1 CLIDOX）或 同等效力消毒劑進行表面擦拭。

(3) 物料：采用輻照或高壓滅菌的飼料、墊料、水，定期進行無菌檢測；其余物料進行高壓或其他滅菌方式處理，保證滅菌效果。

(4) 人員：固定人員（飼養(yǎng)員、實驗員）進行同一房間的動物處理，不交叉處理其他房間內(nèi)動物。若實驗人員同時進行不同實驗項目，則應保證先操作裸鼠品系，再操作其他品系。

(5) 日常清潔消毒：不只局限于動物房的飼養(yǎng)間，其它包括實驗間、走廊、更衣室、緩沖間等，都應使用含有效氯400～700 mg/L的消毒液（或1:18:1 CLIDOX）進行地面、墻面、天花板、 桌面、房門、籠架、籠具及其他設(shè)備外表面等的消毒。

(6) 籠盒操作：盡可能減少籠盒操作，若同一房間內(nèi)放置了多個批次、多種品系的動物，建議先操作新到的裸鼠品系，再操作其他品系。如果一個飼養(yǎng)間內(nèi)既有裸鼠，也有免疫程度更為嚴 重的有毛SCID鼠，建議先操作裸鼠，再操作SCID鼠（因為現(xiàn)有資料證明牛棒只感染無毛鼠，這或許與無毛鼠缺少毛發(fā)這層物理屏障有關(guān)）。

a) 飼養(yǎng)/實驗人員應穿著全套滅菌PPE（隔離衣、口罩、頭套、鞋套、手套等），操作前使用含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1 CLIDOX）充分消毒手套，同時建議佩戴雙層手套，并 密封手套與袖口連接處；

b) 在關(guān)閉超凈臺或生物安全柜紫外燈之前，應確保已照射滅菌20min。開啟通風，再次使用含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1 CLIDOX）進行內(nèi)部噴霧消毒；

c) 從籠架上取下籠盒，使用含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1 CLIDOX）噴霧籠盒外表面，并放置于超凈臺或生物安全柜中；

d) 在超凈臺或生物安全柜中操作籠盒時，應確保雙手位于風幕內(nèi)10cm；

e) 將小鼠從臟盒轉(zhuǎn)移至新盒中時，建議使用鑷子，而且最好交替使用2把。一把在用時，另一把可浸泡于含有效氯2000mg/L的消毒液（或1:5:1 CLIDOX）中消毒，鑷子浸泡消毒的時間應 不低于3min。同一籠盒動物可使用同把鑷子，但不同籠盒需更換不同鑷子。消毒劑應保證當天新鮮配制，以防有機碎屑積累過多而導致消毒效果降低。

f) 操作完一個籠盒，應使用酒精對手套進行噴霧消毒，然后再進行下一籠盒的操作。每操作完同一個實驗項目、同一個動物品系或一面IVC籠架（最多不超過70盒），都應及時更換新手 套，以減少交叉感染的可能。

g) 垃圾處理：臟墊料、實驗廢棄物、動物尸體等應及時封袋，儲存于指定位置，無遺灑。每日垃圾應有專人負責收集，收集后該人員不得再接觸動物，并用含有效氯2000mg/L的消毒液 （或1:5:1 CLIDOX）對垃圾箱進行噴霧消毒。

Q6 對于牛棒狀桿菌感染，如何進行日常觀察及病情判斷？

研究過程中如果用到裸鼠，除了實驗本身要求的所做觀察項目之外，研究人員還應增加一項裸鼠皮膚皮屑的觀察。如果觀察到某只裸鼠皮膚表面出 現(xiàn)了大量皮屑，應立即引起足夠重視：有可能是單純彌漫性皮炎，也有可能是牛棒狀桿菌感染。如果是前者，皮屑癥狀往往僅表現(xiàn)為個體散發(fā)，且同籠動物之間不會互相傳染，牛棒狀桿菌的 檢測呈陰性。如果某只動物出現(xiàn)皮屑癥狀后，同籠或鄰近籠盒的動物在后續(xù)3-5天內(nèi)也全部出現(xiàn)相同癥狀，基本上可以判斷為牛棒狀桿菌感染

Q7 如果出現(xiàn)牛棒狀桿菌感染，如何進行后續(xù)操作？

(1) 患病動物處理：觀察到牛棒狀桿菌感染的現(xiàn)象后，建議對患病動物進行應急檢測（細菌培養(yǎng)或PCR）。如果的確感染了牛棒狀桿菌，一般不建議對患病動物進行治療。建議立即將同籠 動物全部淘汰，密封并進行無害化處理；籠盒（包含盒內(nèi)物料）進行高壓處理后再進行臟墊料傾倒、清洗、消毒處理。若動物極其珍貴或治療處理不影響實驗研究，患病動物可以通過給予抗 生素治療減少臨床癥狀，牛棒狀桿菌對四環(huán)素、恩諾沙星和氨芐西林敏感。同時，可以使用碘液等對病變皮膚進行局部涂抹，每日1-2次，可改善皮膚病變，但已增生的角質(zhì)需較長時間恢復（ 不可使用含氯或含醛成分的藥物涂抹皮膚）。由于抗生素治療僅能抑制臨床癥狀，而不能根除牛棒狀桿菌，故對于珍貴動物，需通過胚胎移植或剖腹產(chǎn)等手段進行凈化。

(2) 動物種群處理：如果種群內(nèi)檢測到有牛棒狀桿菌陽性個體存在，建議全群淘汰。

(3) 設(shè)施凈化：受感染的動物全部淘汰后，可通過熏蒸（例如，甲醛、過氧化氫等）方式重新凈化房間。房間無菌狀況檢測合格后，方可引進牛棒狀桿菌檢驗為陰性的動物。同時在后續(xù) 管理中，建議加強生物防控措施，密切觀察動物狀況，防止該病再次感染和蔓延。

Q8 為什么我收到的裸鼠有的個體長毛？

裸鼠并不是真正意義上的無毛，長毛是一種正常的生理現(xiàn)象。

裸鼠毛囊與正常有毛鼠相比，毛囊數(shù)量和功能都沒有差別，均能夠產(chǎn)生正常的毛根和毛桿。但對于純合子裸鼠來說，由于Foxn1基因功能缺失，毛桿中缺乏角蛋白而變得非常纖弱，絕大部 分毛桿不能正常穿透表皮，而是扭曲盤繞在膨脹的毛囊漏斗內(nèi)，因此皮膚眼觀上為光裸的。

裸鼠出生后大約十天左右，在頭面部、頸部可見稀疏的毛發(fā)生長；隨著周齡增加，到5-6周，在軀干的其他部位也可見稀疏毛發(fā)的生長。

維通利華專門委托部分客戶進行了對比實驗，從腫瘤接種實驗和藥物研發(fā)單位提供的使用情況來看，這部分長有稀疏被毛的裸鼠對實驗結(jié)果沒有影響。

(Mecklenburg L, Tychsen B, Paus R. 2005, Learning from nudity: lessons from the nude phenotype. [J] Exp Dermatol.14: 797–810.)

a：野生型（+/+ ）正常發(fā)育的毛桿

b：裸鼠毛桿纖弱，扭曲盤繞在膨脹的毛囊漏斗內(nèi)

c：野生型（+/+ ）毛囊

d：裸鼠毛囊與野生型（+/+ ）相比，沒有明顯區(qū)別

Q9 請問SHR（自發(fā)性高血壓大鼠）的喂養(yǎng)有沒有特殊要求？

沒有特殊要求，只要飼養(yǎng)條件（包括飼料、墊料、飲用水、溫濕度等）符合國家相關(guān)標準即可。同時我們建議環(huán)境噪音在符合國標的前提下越低越好（國標對飼養(yǎng)設(shè)施內(nèi)噪音的要求為不大于60分貝），SHR大鼠對噪音更為敏感些。

Q10 高血壓大鼠(SHR)血壓升高的機制是什么？

SHR大鼠是1963年京都醫(yī)學院（Kyoto school of Medicine）Okamoto利用有顯著高血壓癥狀的遠交Wistar Kyoto雄性鼠和帶有輕微高血壓癥狀的雌性鼠交配,自此開始兄妹交配并連續(xù)選擇 自發(fā)高血壓性狀。

其發(fā)生的主要機制目前還不清楚，可能是多基因共同作用的結(jié)果，目前有一些關(guān)于影響SHR血壓的文獻報道，但是尚無定論！

Q11 自行測定SHR大鼠血壓需要注意哪些問題？

(1) 動物的性別、目前所處的周齡。因為性別、周齡不同，血壓值差異較大；

(2) 血壓計自身的原因：

A. 廠家、型號。國產(chǎn)血壓計靈敏度、穩(wěn)定性會相對差一些；
B. 血壓計的校準非常關(guān)鍵，否則不能顯示真實血壓值（校準時，需要有外接壓力表）；
C. 血壓測定時，加壓的初始設(shè)定值也很重要（250mmHg或者200mmHg對測定值影響較大）；
D. 何種測量方法？（有創(chuàng)插管法、無創(chuàng)尾動脈套環(huán)法）
E. 鼠尾無創(chuàng)測定時，檢查所用套環(huán)是否靈敏，有無老化現(xiàn)象？
F. 測量環(huán)境的溫度？動物狀態(tài)？血壓測量值的標準差情況？
G. 建議換用別的血壓計進行測試，重新提供測定值。

(4) 一定要設(shè)立對照組，可以使用WKY或CD、Wistar（最好已經(jīng)排除了血壓值偏高的個體），對照組收縮壓一般在90-120mmHg之間，不會過高或過低。

Q12 Dahl/SS大鼠的對照組應選用何種品系動物？

SS-Chr 13^BN染色體取代大鼠。

Q13 應用Dahl/SS大鼠進行研究時應選用何種飼料？

Dahl/SS大鼠的建議預處理：在項目實施前飼喂AIN-76A 0.3%氯鹽飼料，在將動物用于鹽相關(guān)實驗前，我們推薦使用此種飼料。實驗時，根據(jù)您的實驗要求，Charles River推薦使用4%或8%的AIN-76A進行。

Q14 Dahl/SS大鼠在飼喂低鹽飼料時，是否能保持正常的血壓值？

可以。飼喂低鹽飼料時，Dahl/SS大鼠血壓正常（例如，<140mmHg心臟收縮壓）。

Q15 Dahl/SS大鼠與SS-Chr 13BN染色體取代大鼠之間的區(qū)別有多大？

它們之間98%完全一致，只是包括腎素基因在內(nèi)的13號染色體上的基因不同。

Q16 飼喂Dahl/SS大鼠的飼料是否會影響其高血壓的發(fā)展？

會的，飼料中蛋白質(zhì)、碳水化合物和脂肪的來源對此動物模型的高血壓和腎病發(fā)展有著極其深遠的影響。

Q17 Dahl/SS大鼠模型的高血壓是哪種類型？

Dahl/SS大鼠為低腎素鹽敏感性高血壓，與腎功能衰退相關(guān)。

Q18 ZDF是型Ⅰ糖尿病還是Ⅱ型糖尿病？

ZDF是Ⅱ型糖尿病，同時伴有高血脂癥（高甘油三酯血癥）、葡萄糖不耐癥（高葡萄糖血癥）、肥胖癥、高胰島素血癥。

Q19 ZDF基因型有哪幾種，如何區(qū)分？

ZDF大鼠包含4類，如下表。4周齡離乳，5周齡根據(jù)體重能明顯區(qū)分胖型和瘦型動物。

Q20 ZDF胖型大鼠推薦銷售周齡？何時開始飼喂Purina5008飼養(yǎng)周齡較適宜，需要誘導飼養(yǎng)幾周血糖值會顯著升高？

ZDF推薦銷售的周齡為7周齡。

客戶接到大鼠，適應性飼養(yǎng)1周后，推薦從8周齡開始使用Purina5008飼料進行誘導，誘導3周可以觀察到血糖明顯上升，誘導4周后血糖值顯著升高。

Q21 ZDF胖型大鼠經(jīng)飼喂Purina5008四周后血糖值能達到多少，隨機血糖能達到多少？

Purina5008飼料誘導4周后，隨機血糖平均值19.5mmol/L，標準差2.2mmol/L。95%的個體（平均值±2SD）隨機血糖值在15.1-23.9mmol/L。

Q22 ZDF胖型大鼠飼料每天消耗情況是怎么樣？

隨著糖尿病癥狀逐漸加重，每天飼料消耗也會逐漸上升。誘導前期（誘導1-2周階段），每天每只大鼠消耗25-30g；誘導后期（3-4周階段），每天消耗35-40g；后續(xù)繼續(xù)誘導，每天消耗大 約40g。